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中科光析科學(xué)技術(shù)研究所
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發(fā)布時(shí)間:2025-08-14
關(guān)鍵詞:蛋白質(zhì)羰基化二硝基苯肼測(cè)試儀器,蛋白質(zhì)羰基化二硝基苯肼測(cè)試方法,蛋白質(zhì)羰基化二硝基苯肼測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)
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來(lái)源:北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所
因業(yè)務(wù)調(diào)整,部分個(gè)人測(cè)試暫不接受委托,望見(jiàn)諒。
蛋白質(zhì)羰基含量(總羰基):定量檢測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的總羰基含量,反映蛋白質(zhì)氧化損傷程度;測(cè)量范圍:0.1~10nmol/mg蛋白質(zhì);檢測(cè)限:0.05nmol/mg蛋白質(zhì);回收率:85%~105%;CV值:≤6%。
可溶性蛋白質(zhì)含量:測(cè)定樣品中可溶性蛋白質(zhì)的濃度,用于羰基含量的歸一化計(jì)算;測(cè)量范圍:0.1~20mg/mL;檢測(cè)限:0.05mg/mL;CV值:≤5%;反應(yīng)時(shí)間:30min(37℃)。
DNPH衍生效率:評(píng)估DNPH與蛋白質(zhì)羰基的反應(yīng)完全性;衍生率:≥90%;反應(yīng)時(shí)間:605min(室溫);pH范圍:2.0~4.0(鹽酸溶液)。
腙衍生物純度:分析DNPH衍生后腙衍生物的純度,排除雜質(zhì)干擾;純度:≥95%(HPLC法);雜質(zhì)峰面積:≤5%;保留時(shí)間變異系數(shù):≤1%。
蛋白質(zhì)氧化指數(shù):計(jì)算蛋白質(zhì)羰基含量與可溶性蛋白質(zhì)含量的比值,反映氧化損傷程度;指數(shù)范圍:0.01~1.0;單位:nmol/mg蛋白質(zhì);數(shù)值精度:0.005。
樣品空白值:測(cè)定未加DNPH的樣品背景值,校正非特異性吸收;空白值:≤0.02吸光度單位(370nm);CV值:≤3%;平行樣數(shù)量:≥3個(gè)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍:驗(yàn)證DNPH腙標(biāo)準(zhǔn)品的線性關(guān)系,確保定量準(zhǔn)確性;線性范圍:0.05~5nmol/mL;相關(guān)系數(shù)(R):≥0.995;截距:≤0.01吸光度單位。
蛋白質(zhì)變性程度:評(píng)估樣品處理過(guò)程中蛋白質(zhì)的變性情況,避免假陽(yáng)性結(jié)果;變性率:≤10%(SDS-PAGE法);溶解度變化:≤5%;電泳條帶清晰度:≥90%(無(wú)明顯降解帶)。
交叉反應(yīng)率:檢測(cè)DNPH與非羰基化合物(如氨基、巰基)的交叉反應(yīng);與賴氨酸氨基反應(yīng)率:≤2%;與半胱氨酸巰基反應(yīng)率:≤1%;與酪氨酸酚羥基反應(yīng)率:≤0.5%。
批次間重復(fù)性:評(píng)價(jià)不同實(shí)驗(yàn)批次間的檢測(cè)結(jié)果一致性;CV值:≤8%(n=5批次);偏差:≤10%(與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比);總誤差:≤15%。
樣品穩(wěn)定性:考察樣品在儲(chǔ)存條件下的羰基含量變化;4℃儲(chǔ)存7天:羰基含量變化≤10%;-20℃儲(chǔ)存30天:變化≤5%;室溫儲(chǔ)存24小時(shí):變化≤15%。
生物醫(yī)學(xué)樣品:包括血清、血漿、組織勻漿、尿液等,用于臨床或基礎(chǔ)研究中評(píng)估氧化應(yīng)激相關(guān)疾病(如阿爾茨海默病、糖尿病、心血管疾?。┑牡鞍踪|(zhì)損傷。
食品樣品:包括肉制品(如牛肉、豬肉)、乳制品(如牛奶、酸奶)、谷物(如小麥、玉米)、油脂(如植物油、動(dòng)物油),檢測(cè)食品加工或儲(chǔ)存過(guò)程中的蛋白質(zhì)氧化降解。
飼料樣品:包括畜禽飼料、水產(chǎn)飼料、寵物飼料,評(píng)估飼料中蛋白質(zhì)的氧化程度,防止氧化變質(zhì)影響動(dòng)物生長(zhǎng)性能和健康。
植物樣品:包括植物組織(如葉片、根)、蔬菜(如菠菜、白菜)、水果(如蘋(píng)果、香蕉),研究植物在逆境(干旱、病蟲(chóng)害、重金屬污染)下的氧化應(yīng)激反應(yīng)。
微生物樣品:包括細(xì)菌(如大腸桿菌、乳酸菌)、真菌(如酵母菌、霉菌),檢測(cè)微生物在發(fā)酵或脅迫條件下的蛋白質(zhì)氧化情況,優(yōu)化發(fā)酵工藝參數(shù)。
藥物樣品:包括蛋白質(zhì)藥物(如胰島素、抗體)、多肽藥物、中藥提取物,監(jiān)測(cè)藥物儲(chǔ)存過(guò)程中的蛋白質(zhì)氧化降解,保證藥物穩(wěn)定性和有效性。
化妝品樣品:包括含蛋白質(zhì)的護(hù)膚品(如膠原蛋白面膜)、護(hù)發(fā)產(chǎn)品(如氨基酸洗發(fā)水),評(píng)估化妝品中蛋白質(zhì)成分的氧化損傷,確保產(chǎn)品安全性和保質(zhì)期。
環(huán)境樣品:包括水體沉積物、土壤微生物、大氣顆粒物,分析環(huán)境污染物(如重金屬、多環(huán)芳烴、臭氧)對(duì)生物蛋白質(zhì)的氧化損傷,評(píng)價(jià)環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)。
農(nóng)業(yè)產(chǎn)品:包括糧食(如大米、小麥)、油料作物(如大豆、花生)、經(jīng)濟(jì)作物(如棉花、煙草),研究農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中(收獲、貯藏、加工)蛋白質(zhì)的氧化變化,優(yōu)化貯藏條件。
寵物食品樣品:包括犬糧、貓糧、寵物零食,檢測(cè)寵物食品中蛋白質(zhì)的氧化程度,防止氧化產(chǎn)物(如醛類)對(duì)寵物消化系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的危害。
GB/T38496-2020《蛋白質(zhì)羰基含量的測(cè)定二硝基苯肼法》(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),適用于生物樣品、食品等的蛋白質(zhì)羰基檢測(cè))。
ISO16371:2014《Foodproducts-Determinationofproteincarbonylcontent-DNPHmethod》(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),食品領(lǐng)域蛋白質(zhì)羰基定量方法)。
ASTME2965-14(2020)《JianCeTestMethodforDeterminationofProteinCarbonylContentinBiologicalSamplesUsing2,4-Dinitrophenylhydrazine》(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn),生物樣品中蛋白質(zhì)羰基測(cè)定)。
ISO23977-1:2021《Molecularbiomonitoring-Part1:Determinationofproteincarbonylsinhumanbiologicalsamples》(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),人體生物樣品分子生物監(jiān)測(cè))。
GB5009.232-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中羰基價(jià)的測(cè)定》(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),食品中羰基化合物總量測(cè)定,含蛋白質(zhì)羰基間接定量)。
ISO18330:2003《Milkandmilkproducts-Determinationofproteincarbonylcontent》(國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),乳及乳制品蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)定)。
ASTMD7689-11(2017)《JianCeTestMethodforDeterminationofProteinCarbonylContentinProteinsIsolatedfromSoil》(美國(guó)標(biāo)準(zhǔn),土壤分離蛋白質(zhì)羰基測(cè)定)。
紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì):用于DNPH衍生后腙衍生物的吸光度測(cè)定,定量蛋白質(zhì)羰基含量;波長(zhǎng)范圍:200~800nm;吸光度范圍:0~2.0A;分辨率:1nm;straylight:≤0.05%(220nm);數(shù)據(jù)輸出:USB接口、打印機(jī)。
高效液相色譜儀(HPLC):分離和定量DNPH衍生的腙衍生物,提高檢測(cè)特異性;柱溫范圍:室溫~80℃;流速范圍:0.1~5.0mL/min;檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器(280nm、370nm);柱效:≥10000理論塔板數(shù)(C18柱,5μm);梯度洗脫:支持二元、三元溶劑系統(tǒng)。
蛋白質(zhì)定量分析儀(BCA法):測(cè)定樣品中可溶性蛋白質(zhì)含量,用于羰基含量的歸一化計(jì)算;測(cè)量范圍:0.2~50μg/mL;檢測(cè)限:0.1μg/mL;CV值:≤3%;反應(yīng)時(shí)間:30min(37℃);樣品容量:96孔板(100μL/孔)。
臺(tái)式離心機(jī):分離樣品中的蛋白質(zhì)沉淀,去除未反應(yīng)的DNPH和雜質(zhì);最大轉(zhuǎn)速:15000rpm;最大相對(duì)離心力:21000g;容量:1.5~50mL離心管;溫度控制:4~25℃;定時(shí)范圍:0~99min。
恒溫水浴鍋:控制DNPH與蛋白質(zhì)羰基的反應(yīng)溫度,保證反應(yīng)完全性;溫度范圍:室溫~100℃;溫度精度:0.5℃;攪拌速度:0~500rpm;容量:5L;內(nèi)膽材質(zhì):不銹鋼(304)。
超純水機(jī):制備實(shí)驗(yàn)用超純水,避免水中雜質(zhì)干擾DNPH反應(yīng);電阻率:≥18.2MΩcm(25℃);總有機(jī)碳(TOC):≤10ppb;微生物含量:≤1CFU/mL;顆粒物(≥0.22μm):≤1個(gè)/mL;產(chǎn)水量:1~2L/min。
pH計(jì):調(diào)節(jié)DNPH反應(yīng)體系的pH值,確保反應(yīng)條件穩(wěn)定;測(cè)量范圍:0~14;精度:0.01pH;溫度補(bǔ)償:自動(dòng)(0~100℃);電極:玻璃電極(可充式);校準(zhǔn)點(diǎn):2點(diǎn)(4.01、7.00、10.01)。
1、咨詢:提品資料(說(shuō)明書(shū)、規(guī)格書(shū)等)
2、確認(rèn)檢測(cè)用途及項(xiàng)目要求
3、填寫(xiě)檢測(cè)申請(qǐng)表(含公司信息及產(chǎn)品必要信息)
4、按要求寄送樣品(部分可上門(mén)取樣/檢測(cè))
5、收到樣品,安排費(fèi)用后進(jìn)行樣品檢測(cè)
6、檢測(cè)出相關(guān)數(shù)據(jù),編寫(xiě)報(bào)告草件,確認(rèn)信息是否無(wú)誤
7、確認(rèn)完畢后出具報(bào)告正式件
8、寄送報(bào)告原件