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心肌纖維化模型檢測

發布時間:2025-08-12

關鍵詞:心肌纖維化模型測試儀器,心肌纖維化模型測試方法,心肌纖維化模型測試案例

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來源:北京中科光析科學技術研究所

文章簡介:

心肌纖維化模型檢測聚焦于模型構建后的病理特征、分子標志物及功能學評估,涵蓋組織形態、細胞外基質成分、纖維化相關因子等關鍵指標,為藥物研發及機制研究提供客觀數據支持。
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因業務調整,部分個人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項目

心肌膠原容積分數(CVF):通過天狼星紅染色定量心肌組織中膠原纖維占比,檢測范圍0~100%,計算精度±1%。

Ⅰ型膠原蛋白(Col-Ⅰ)表達水平:采用免疫組化法測定心肌組織中Col-Ⅰ蛋白分布及含量,陽性面積百分比測量精度±2%。

Ⅲ型膠原蛋白(Col-Ⅲ)mRNA水平:通過qPCR技術檢測心肌組織中Col-Ⅲ基因轉錄水平,相對定量誤差±5%。

轉化生長因子-β1(TGF-β1)濃度:采用ELISA法測定血清或心肌組織勻漿中TGF-β1含量,檢測范圍10~1000pg/mL,最低檢出限5pg/mL。

基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)活性:通過明膠酶譜法分析心肌組織中MMP-2的酶解活性,條帶密度分析精度±3%。

金屬蛋白酶組織抑制劑-1(TIMP-1)表達:采用Western blot法檢測心肌組織中TIMP-1蛋白含量,灰度值定量誤差±4%。

心肌成纖維細胞(CFs)增殖率:通過CCK-8法測定體外培養CFs的增殖能力,檢測范圍0.1~10OD值,重復性CV≤5%。

心肌組織羥脯氨酸含量:采用比色法測定心肌組織中羥脯氨酸濃度,檢測范圍5~100μg/mg蛋白,回收率90%~110%。

心肌細胞凋亡率:通過流式細胞術檢測心肌組織中凋亡細胞比例,熒光染色信噪比≥10:1,檢測精度±1%。

左心室射血分數(LVEF):采用超聲心動圖測定模型動物左心室收縮功能,測量范圍30%~80%,誤差±2%。

心肌組織纖維化面積比:通過Masson三色染色定量纖維化區域占心肌組織總面積的比例,計算精度±1%。

纖維化相關microRNA(miR-21)表達:采用qPCR技術檢測心肌組織中miR-21的相對表達量,Ct值變異系數≤3%。

Smad3蛋白磷酸化水平:采用Western blot法檢測心肌組織中p-Smad3/Smad3比值,反映TGF-β1信號通路激活程度,灰度值比值誤差±5%。

心肌組織α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達:采用免疫熒光法測定心肌成纖維細胞活化標記物α-SMA的陽性細胞比例,檢測精度±1%。

檢測范圍

動物模型:包括小鼠、大鼠、兔等實驗動物的心肌纖維化模型,如主動脈縮窄模型、異丙腎上腺素誘導模型、醛固酮輸注模型等。

細胞模型:體外培養的心肌成纖維細胞(CFs)纖維化模型,如TGF-β1誘導的CFs活化模型、AngⅡ刺激的CFs增殖模型。

藥物干預模型:評估藥物對心肌纖維化的抑制或逆轉作用的模型,如抗纖維化藥物(如吡非尼酮)治療后的動物模型、中藥提取物干預的細胞模型。

基因修飾模型:基因敲除或過表達的心肌纖維化模型,如TGF-β1轉基因小鼠模型、Smad3 knockout模型、miR-21抑制劑處理的細胞模型。

缺血性心肌病模型:心肌梗死術后心肌纖維化模型,如冠狀動脈結扎誘導的大鼠心肌纖維化模型、微創球囊封堵誘導的小鼠心肌梗死模型。

非缺血性心肌病模型:如擴張型心肌病(DCM)伴發的心肌纖維化模型、肥厚型心肌病(HCM)心肌間質纖維化模型。

代謝性心肌病模型:糖尿病或肥胖誘導的心肌纖維化模型,如db/db小鼠心肌纖維化模型、高脂飲食誘導的大鼠心肌纖維化模型。

毒性誘導模型:化療藥物(如阿霉素、表阿霉素)或重金屬(如鎘、鉛)誘導的心肌纖維化模型,如阿霉素腹腔注射誘導的小鼠心肌纖維化模型。

炎癥性心肌病模型:自身免疫性心肌炎伴發的心肌纖維化模型,如實驗性自身免疫性心肌炎(EAM)模型、柯薩奇病毒B3感染誘導的心肌纖維化模型。

衰老相關模型:老年動物自然發生的心肌纖維化模型,如18-24月齡C57BL/6小鼠心肌纖維化模型、24月齡大鼠心肌間質纖維化模型。

體外3D模型:三維培養的心肌組織纖維化模型,如組織工程心肌片層纖維化模型、微流控芯片構建的3D心肌纖維化模型。

臨床樣本:人類心肌纖維化患者的心肌組織或血清樣本,用于纖維化 biomarker(如Col-Ⅰ、TGF-β1)的驗證及相關性分析。

檢測標準

ISO 15189:2022 醫學實驗室質量和能力要求:適用于心肌纖維化模型檢測實驗室的質量控制和能力評估。

GB/T 22286-2008 動物源性食品中羥脯氨酸含量的測定:用于心肌組織羥脯氨酸含量檢測的方法學參考。

ASTM E1398-18 流式細胞術檢測細胞凋亡的標準指南:適用于心肌細胞凋亡率的檢測。

GB/T 38477-2020 實時熒光定量PCR檢測方法通則:用于纖維化相關基因(如Col-Ⅰ、miR-21)的表達分析。

ISO 20186-1:2019 分子體外診斷檢查—核酸擴增法—第1部分:通用要求:適用于qPCR檢測的質量控制。

GB/T 16129-2012 動物心電圖檢測方法:用于模型動物心臟功能(如LVEF)的超聲心動圖輔助評估。

ASTM F3169-18 組織工程醫療產品—細胞活性和增殖的測定:適用于心肌成纖維細胞增殖率的檢測。

GB/T 27403-2008 實驗室質量控制規范—動物實驗:用于動物模型檢測的實驗操作規范。

ISO 17025:2017 檢測和校準實驗室能力的通用要求:適用于心肌纖維化模型檢測實驗室的整體能力評估。

GB/T 19495.5-2018 轉基因生物檢測—核酸定性PCR檢測方法:用于基因修飾模型的基因型鑒定。

ASTM E2149-16 免疫組化染色法檢測組織中蛋白表達的標準指南:適用于Col-Ⅰ、α-SMA等蛋白的表達檢測。

GB/T 21767-2008 動物組織病理學檢查規程:用于心肌組織形態學檢測的操作規范。

檢測儀器

天狼星紅染色系統:包括染色液、正置顯微鏡及圖像分析軟件,用于心肌膠原容積分數(CVF)的定量分析,可自動識別膠原纖維(紅色)與心肌細胞(黃色),計算膠原占比。

實時熒光定量PCR儀:具備多通道(FAM、VIC、ROX等)檢測功能,支持96孔板高通量檢測,用于纖維化相關基因(如Col-Ⅰ、miR-21、TGF-β1)的mRNA表達水平檢測,相對定量采用ΔΔCt法,絕對定量采用標準曲線法。

酶聯免疫吸附測定(ELISA)儀:具備450nm、570nm雙波長檢測功能,支持單通道或多通道同時檢測,用于血清、血漿或組織勻漿中纖維化相關因子(如TGF-β1、TIMP-1、PDGF)的濃度測定,檢測范圍10~1000pg/mL,最低檢出限≤5pg/mL。

流式細胞儀:具備熒光激發(488nm、633nm)及檢測功能,支持Annexin V/PI雙染色法,用于心肌細胞凋亡率的檢測,可區分凋亡細胞(Annexin V+PI-)、壞死細胞(Annexin V+PI+)及正常細胞(Annexin V-PI-),檢測精度±1%。

超聲心動圖儀:具備高頻探頭(15~20MHz)及多普勒功能,支持M型、B型及脈沖多普勒成像,用于模型動物(如小鼠、大鼠)左心室射血分數(LVEF)、短軸縮短率(FS)的測定,實時顯示心臟結構(如心室壁厚度、心腔大小)及功能參數,測量誤差±2%。

明膠酶譜分析系統:包括垂直電泳儀、凝膠成像系統及分析軟件,用于心肌組織中基質金屬蛋白酶(如MMP-2、MMP-9)活性的檢測,通過明膠凝膠電泳分離酶蛋白,酶解后顯示透明條帶,條帶密度與酶活性成正比,分析精度±3%。

比色法檢測儀:具備可見光(550nm)吸收檢測功能,支持微孔板或 cuvette 檢測,用于心肌組織羥脯氨酸含量的測定,通過羥脯氨酸與氯胺T、對二甲氨基苯甲醛反應生成紅色化合物,顏色深淺與濃度線性相關,檢測范圍5~100μg/mg蛋白,回收率90%~110%。

Western blot系統:包括SDS-PAGE電泳儀、半干轉膜儀、化學發光顯影系統,用于纖維化相關蛋白(如TIMP-1、Smad3、α-SMA)的表達水平檢測,通過抗體特異性結合目標蛋白,化學發光顯影后計算灰度值,定量誤差±4%。

免疫熒光顯微鏡:具備熒光激發(405nm、488nm、561nm)及共聚焦功能,用于心肌組織中α-SMA、Col-Ⅰ的定位及表達檢測,可觀察成纖維細胞活化狀態及膠原分布,分辨率≤0.2μm。

細胞計數儀:具備臺盼藍染色功能,支持自動細胞計數及活力分析,用于心肌成纖維細胞(CFs)增殖率的輔助檢測,計數范圍1×10^4~1×10^6 cells/mL,活力檢測精度±1%。

檢測流程

1、咨詢:提品資料(說明書、規格書等)

2、確認檢測用途及項目要求

3、填寫檢測申請表(含公司信息及產品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品,安排費用后進行樣品檢測

6、檢測出相關數據,編寫報告草件,確認信息是否無誤

7、確認完畢后出具報告正式件

8、寄送報告原件

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