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牙膏金黃色葡萄球菌檢測

發(fā)布時(shí)間:2025-08-12

關(guān)鍵詞:牙膏金黃色葡萄球菌測試案例,牙膏金黃色葡萄球菌測試周期,牙膏金黃色葡萄球菌測試機(jī)構(gòu)

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來源:北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所

文章簡介:

牙膏金黃色葡萄球菌檢測是保障牙膏衛(wèi)生安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié),通過定性篩選與定量計(jì)數(shù),排查牙膏中金黃色葡萄球菌污染情況,需依據(jù)國家及國際微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),進(jìn)行分離、培養(yǎng)、鑒定及毒素檢測。
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因業(yè)務(wù)調(diào)整,部分個(gè)人測試暫不接受委托,望見諒。

檢測項(xiàng)目

金黃色葡萄球菌定性檢測:通過增菌培養(yǎng)(7.5%氯化鈉肉湯)、分離純化(甘露醇鹽瓊脂)及生化鑒定(凝固酶試驗(yàn)),判斷牙膏中是否存在金黃色葡萄球菌。檢測限:≤10CFU/g(增菌后)。

金黃色葡萄球菌定量檢測(平板計(jì)數(shù)法):將牙膏樣品梯度稀釋后,接種于甘露醇鹽瓊脂平板,36±1℃培養(yǎng)48小時(shí),計(jì)數(shù)典型金黃色葡萄球菌菌落(黃色、凸起、有透明圈)。計(jì)數(shù)范圍:10~1000CFU/g(每平板菌落數(shù)30~300個(gè)為有效)。

凝固酶試驗(yàn)(試管法):取金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物接種于兔血漿中,36±1℃孵育4小時(shí),觀察血漿凝固情況,用于菌種鑒定(金黃色葡萄球菌為凝固酶陽性)。反應(yīng)時(shí)間:≤4小時(shí)(超過4小時(shí)未凝固為陰性)。

耐熱核酸酶試驗(yàn):將金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物加熱(100℃,15分鐘)滅活后,接種于DNA瓊脂平板,36±1℃培養(yǎng)24小時(shí),觀察平板上是否出現(xiàn)透明圈(核酸酶分解DNA所致)。結(jié)果判斷:透明圈直徑≥2mm為陽性。

甘露醇發(fā)酵試驗(yàn):將金黃色葡萄球菌接種于甘露醇鹽瓊脂培養(yǎng)基,36±1℃培養(yǎng)24小時(shí),觀察培養(yǎng)基顏色變化(分解甘露醇產(chǎn)酸使酚紅指示劑變黃)。培養(yǎng)基pH:7.4(初始),變黃pH閾值:≤6.8。

血漿凝固酶試驗(yàn)(玻片法):取金黃色葡萄球菌菌落與兔血漿混合,立即觀察是否出現(xiàn)凝集(結(jié)合型凝固酶),用于快速鑒定。操作時(shí)間:≤10分鐘(10分鐘內(nèi)未凝集為陰性)。

金黃色葡萄球菌定量檢測(MPN法):將牙膏樣品稀釋成不同濃度梯度,接種于增菌培養(yǎng)基(7.5%氯化鈉肉湯),36±1℃培養(yǎng)24小時(shí),根據(jù)陽性管數(shù)查MPN表計(jì)算樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)量。MPN范圍:3~300MPN/g(適用于低菌量樣品)。

藥物敏感性試驗(yàn)(Kirby-Bauer法):將金黃色葡萄球菌菌液均勻涂布于Mueller-Hinton瓊脂平板,貼上抗菌藥物紙片(如青霉素、頭孢唑林、紅霉素),36±1℃培養(yǎng)18小時(shí),測量抑菌圈直徑,判斷耐藥性。紙片含量:青霉素10U/片,頭孢唑林30μg/片。

金黃色葡萄球菌腸毒素檢測(ELISA法):利用抗體與腸毒素的特異性結(jié)合,通過酶標(biāo)儀檢測吸光度值,定量或定性分析牙膏中腸毒素含量。檢測限:≤0.1ng/mL(sea毒素),板內(nèi)變異系數(shù)≤5%。

金黃色葡萄球菌基因檢測(PCR法):提取牙膏樣品中細(xì)菌DNA,用特異性引物擴(kuò)增金黃色葡萄球菌特征基因(如nuc基因)或毒素基因(如sea、seb),通過電泳或熒光定量PCR判斷是否存在目標(biāo)基因。擴(kuò)增片段長度:nuc基因279bp,sea基因310bp。

檢測范圍

普通牙膏:包括含氟牙膏、中草藥牙膏、兒童牙膏等日常使用的牙膏產(chǎn)品,檢測其金黃色葡萄球菌污染情況。

功效牙膏:如抗敏感牙膏、美白牙膏、抗菌牙膏等具有特定功能的牙膏,需符合更嚴(yán)格的微生物限量要求。

特殊用途牙膏:包括醫(yī)用牙膏、孕婦牙膏、老人牙膏等針對(duì)特定人群設(shè)計(jì)的牙膏,需保障微生物安全性。

牙膏原料:如摩擦劑(碳酸鈣、二氧化硅)、保濕劑(甘油、山梨醇)、發(fā)泡劑(十二烷基硫酸鈉)等,檢測原料中的金黃色葡萄球菌污染,防止帶入成品。

牙膏包裝材料:如軟管內(nèi)壁、瓶蓋、泵頭組件等與牙膏直接接觸的包裝部件,排查包裝材料帶來的微生物污染。

進(jìn)口牙膏:來自不同國家和地區(qū)的進(jìn)口牙膏產(chǎn)品,需符合我國牙膏衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及微生物檢測要求。

OEM/ODM牙膏:代加工牙膏產(chǎn)品,檢測其金黃色葡萄球菌含量,確保符合委托方及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求。

天然牙膏:以天然成分(如植物提取物、礦物粉)為主要原料的牙膏,需檢測是否因天然成分引入金黃色葡萄球菌。

兒童牙膏:針對(duì)兒童設(shè)計(jì)的低氟或無氟牙膏,因兒童使用特點(diǎn),需嚴(yán)格控制金黃色葡萄球菌等致病微生物含量。

口腔護(hù)理產(chǎn)品:如牙粉、漱口水、口腔噴霧等與口腔直接接觸的產(chǎn)品,可參考牙膏金黃色葡萄球菌檢測方法進(jìn)行檢測。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

GB 8372-2017 《牙膏》:規(guī)定了牙膏中金黃色葡萄球菌的限量要求(不得檢出)及檢測方法(平板計(jì)數(shù)法、MPN法)。

GB 4789.10-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》:牙膏微生物檢測的主要依據(jù),包含定性及定量檢測方法。

ISO 6888-1:2017 《食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué) 金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù) 第1部分:平板計(jì)數(shù)法》:國際通用的金黃色葡萄球菌定量檢測標(biāo)準(zhǔn),適用于牙膏樣品。

ISO 6888-2:2003 《食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué) 金黃色葡萄球菌計(jì)數(shù) 第2部分:MPN法》:用于牙膏中低菌量金黃色葡萄球菌的定量檢測。

ISO 22717:2006 《化妝品 - 微生物學(xué) - 金黃色葡萄球菌的檢測》:化妝品(包括牙膏)中金黃色葡萄球菌的定性檢測標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T 22115-2008 《牙膏用原料規(guī)范》:規(guī)定了牙膏原料(如摩擦劑、保濕劑)中金黃色葡萄球菌的限量要求(不得檢出)。

ASTM E1848-20 《JianCe Test Method for Enumeration of Staphylococcus aureus in Water by Membrane Filtration》:膜過濾法計(jì)數(shù)金黃色葡萄球菌的標(biāo)準(zhǔn),可用于牙膏樣品的稀釋液檢測。

GB/T 29662-2013 《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》:其中包含化妝品微生物檢測要求,牙膏可參考此規(guī)范進(jìn)行金黃色葡萄球菌檢測。

ANSI/ASQC Z1.4-2008 《Sampling Procedures and Tables for Inspection by Attributes》:抽樣標(biāo)準(zhǔn),用于牙膏樣品的抽取及批量檢驗(yàn)。

WHO Technical Report Series No. 986:2014 《Guidelines for the safe use of chemicals in cosmetics》:提供化妝品微生物安全評(píng)估指南,牙膏可參考其中金黃色葡萄球菌的控制要求。

檢測儀器

微生物培養(yǎng)箱:用于金黃色葡萄球菌的恒溫培養(yǎng),提供適宜的溫度和濕度環(huán)境。功能:溫度控制范圍20~50℃(常用36±1℃),溫度精度±0.5℃,濕度范圍40%~80%(可調(diào)節(jié))。

生物安全柜(Class II A2型):用于樣品處理及接種操作,防止微生物氣溶膠擴(kuò)散,保護(hù)操作人員及環(huán)境。功能:平均風(fēng)速0.38~0.5m/s(工作區(qū)),HEPA濾器過濾效率≥99.99%(0.3μm顆粒),噪聲≤65dB(A)。

高壓蒸汽滅菌器:用于培養(yǎng)基、玻璃器皿及樣品處理工具的滅菌,確保無菌操作。滅菌參數(shù):121℃、103kPa(15psi)、20分鐘(常規(guī)滅菌),溫度均勻性±1℃,容積范圍50~500L(根據(jù)樣品量選擇)。

生物顯微鏡(相差顯微鏡):用于觀察金黃色葡萄球菌的形態(tài)特征(革蘭氏陽性球菌,排列成葡萄串狀),輔助菌種鑒定。放大倍數(shù):40×~1000×(油鏡),分辨率≥0.2μm(1000×?xí)r),目鏡視野直徑≥20mm。

菌落計(jì)數(shù)器(自動(dòng)):用于平板計(jì)數(shù)法中金黃色葡萄球菌菌落的計(jì)數(shù),提高計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性及效率。計(jì)數(shù)范圍0~9999個(gè)菌落,精度±1個(gè)菌落(自動(dòng)識(shí)別),可連接電腦存儲(chǔ)數(shù)據(jù)。

酶標(biāo)儀(微孔板讀板機(jī)):用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測金黃色葡萄球菌腸毒素,定量分析毒素含量。檢測波長:400~750nm(可調(diào)節(jié),常用450nm),吸光度范圍0~4.0A,板內(nèi)變異系數(shù)≤1%(重復(fù)性)。

PCR儀(實(shí)時(shí)熒光定量):用于金黃色葡萄球菌特征基因(如nuc基因)或毒素基因(如sea、seb)的擴(kuò)增檢測,實(shí)現(xiàn)快速定性及定量。反應(yīng)體系:25~100μL(適配8聯(lián)管或96孔板),溫度控制精度±0.5℃,升降溫速率≥3℃/s(快速擴(kuò)增)。

離心機(jī)(臺(tái)式高速):用于樣品勻漿后的固液分離(如去除牙膏中的顆粒雜質(zhì))或細(xì)菌沉淀(如收集培養(yǎng)液中的金黃色葡萄球菌)。轉(zhuǎn)速范圍:0~10000rpm(最大10000rpm),最大相對(duì)離心力12000×g,容量:1.5~50mL(離心管)。

超凈工作臺(tái)(垂直流):用于樣品稀釋及接種前的準(zhǔn)備工作,提供無菌操作環(huán)境,防止空氣中的微生物污染樣品。潔凈等級(jí):ISO Class 5(100級(jí),工作區(qū)),平均風(fēng)速0.45±0.05m/s(工作區(qū)),噪聲≤60dB(A)。

恒溫振蕩器(往復(fù)式):用于增菌培養(yǎng)時(shí)的振蕩混合,促進(jìn)金黃色葡萄球菌與培養(yǎng)基充分接觸,加速生長。振蕩頻率:0~300rpm(可調(diào)節(jié),常用150~200rpm),振幅20mm(往復(fù)距離),溫度控制范圍:室溫~60℃(常用36±1℃)。

檢測流程

1、咨詢:提品資料(說明書、規(guī)格書等)

2、確認(rèn)檢測用途及項(xiàng)目要求

3、填寫檢測申請(qǐng)表(含公司信息及產(chǎn)品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品,安排費(fèi)用后進(jìn)行樣品檢測

6、檢測出相關(guān)數(shù)據(jù),編寫報(bào)告草件,確認(rèn)信息是否無誤

7、確認(rèn)完畢后出具報(bào)告正式件

8、寄送報(bào)告原件

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